Иммунологические и морфологические предикторы клинической гетерогенности пациентов с болезнью Грейвса (по результатам исследования оперативного материала щитовидной железы)

Abstract

В мировой и отечественной тиреоидологии практически отсутствуют исследования, результаты которых могли бы пролить свет на механизм взаимосвязи показателей системного иммунитета и органоспецифического аутоиммунного поражения железы при различных аутоиммунных тиреопатиях, детерминирующих разнообразные клинические паттерны их течения (возраст дебюта, риск развития и выраженность дистиреоза, риск рецидивирования или спонтанной ремиссии заболевания и т.д.). Цель исследования - установить иммунологические и морфологические предикторы клинического течения и функциональных исходов болезни Грейвса (БГ). Материал и методы. Обследовано 45 пациентов с БГ (14 мужчин и 31 женщина) в возрасте 18-55 лет (средний возраст - 47,0 (35,0-53,0)) года, удовлетворяющих следующим критериям: верифицированный диагноз БГ, проживание в Томской области и г. Томске не менее 10 лет, согласие пациента на исследование. Контрольная группа включала 30 человек (средний возраст - (45,3±5,6) года) и была сопоставима по полу и возрасту с группами пациентов с БГ. Исследование включало: определение стандартного для БГ гормонального и серологического профиля (св. Т4, св. Т3, ТТГ, АТ-ТПО, АТ-рТТГ), культивирование мононуклеарных лейкоцитов в полной культуральной среде в течение 24 ч с последующим определением концентраций интерлейкинов (IL-2, IL-4, TNF-альфа) в супернатантах клеточных культур посредством твердофазного иммуноферментного анализа, определение количества клеток крови, несущих мембранно-связанные рецепторы к IL-2, IL-4, TNF-альфа методом проточной лазерной цитометрии на цитометре BD FACS Canto tm ΙΙ (США) с использованием меченых моноклональных антител, стандартное гистологическое исследование постоперационных образцов ткани щитовидной железы (ЩЖ) и иммуногистохимическую детекцию в образцах ткани ЩЖ рецепторов к IL-2, IL-4, TNF-альфа. Результаты. Исходя из полученных результатов, можно выделить два клинико-иммунологических и морфологических кластера синдрома аутоиммунного гипертиреоза у больных с клиническим диагнозом БГ: первый включает формирование 1-го и 2-го гистологических вариантов БГ (минимально выраженная моноцитарная инфильтрация, отсутствие онкоцитарной трансформации эпителия) с определенными клиническими характеристиками (стойкий и выраженный характер гипертиреоза, большие размеры зоба, больший титр АТ-рТТГ и меньший АТ-ТПО, диффузный характер поражения), второй - представлен 3-м гистологическим вариантом с онкоцитарной перестройкой фолликулярного эпителия, выраженной моноцитарно/макрофагальной инфильтрацией с экспрессией TNF-R1 и клиническими паттернами (более старшая возрастная группа пациентов, меньшие размеры зоба, появление «псевдоузлов» при ультразвуковом исследовании, отражающих наличие лимфоидных фолликулов-инфильтратов, более мягкое течение тиреотоксикоза). Вероятно, что 2-й кластер представляет собой сочетание «классической БГ» с аутоиммунным тиреоидитом, тем не менее комплексный анализ клинических и лабораторно-инструментальных показателей позволяет классифицировать таких больных как пациентов с БГ. Заключение. Данный подход, объединяющий исследование показателей системного и локального органоспецифического аутоиммунного воспаления, является перспективным с точки зрения освещения отдельных звеньев иммунопатогенеза аутоиммунных тиреопатий, приближающим исследователей к разработке иммуноинтервенционных терапевтических технологий.

Very little research is devoted to the study of communication systemic immunological changes and local immunological changes in the tissue of the thyroid in autoimmune thyrophaties. The goal of the research was to establish immunologic and morphologic predictors of clinical course and functional outcomes of Graves’s disease (GD). Material and methods. We examined 45 patients with GD (14 men and 31 women) aged 18–55 years (47.0 (35.0–53.0)) years, matching the following criteria: a verified diagnosis GD, accommodation in Tomsk oblast and the Tomsk not less than 10 years, the patient's consent for the study. The control group included 30 people, with an average age of (45.3 ± 5.6) years and was comparable by age and sex with GD patients. The study included: definition of the standard for GD hormonal and serological profile (free T4, free T3, and TSH, antibodies to TPO, antibodies to the TSH receptor), the cultivation of mononuclear leukocytes in complete culture medium within 24 hours with subsequent determination of interleukins concentrations (IL-2, IL-4, TNF-alpha) in culture medium using enzyme-linked immunosorbent assay, determination of the number of blood cells carrying membrane-bound receptors to IL-2, IL-4, TNF-R1 by flow laser cytometry on cytometer BD FACS Canto tmΙΙ (USA) using labeled monoclonal antibody, the standard postoperative histological examination of thyroid gland tissue samples and immunohistochemical detection in samples of thyroid tissue receptors to IL-2, IL-4, TNF-alpha. Results. On the basis of the received results it is possible to allocate 2 clinical-immunologic and morphologic cluster of autoimmune hyperthyroidism syndrome in patients with clinical diagnosis of GD. The first includes the formation of 1 and 2 histological options GD (minimally expressed monocytes infiltration, lack of oncocytic transformation of thyroid epithelium), with some clinical characteristics (persistent and pronounced hyperthyroidism, the large size of goiter, higher titer of receptor TSH-antibody and smaller TPO-antibody, diffuse nature of the lesion), and the second – is represented by 3d histological option with oncocytic restructuring of follicular epithelium, expressed the monocyte/macrophage infiltration with the TNF-RI expression and clinical patterns, including: the older age group of patients, the smaller size of goiter, the emergence of “pseudo nodes” ultrasound, reflecting the presence of lymphoid follicles-infiltrates, more lenient for hyperthyroidism. Probably, that the 2nd cluster is a combination of “classical GD” with autoimmune thyroiditis, however, a set of clinical and laboratory-instrumental signs led to the fact that these patients were in the group of GD patients. Conclusion. This approach (combining study of indicators of systemic and local tissue-specific autoimmune inflammation) is a promising from the point of view of separate parts coverage in the autoimmune thyroids diseases pathogenesis, approximating researchers to develop immune based therapeutic technologies.